pcr结束后在仪器里能放多久?

admin 泰里仪器网 2025-01-16 16:48 0 阅读

一、pcr结束后在仪器里能放多久?

这个需要看你pcr上机是Z后一步是不是设置的4度forever。如果是的话跟放冰箱里一样,如果不是Z好放在冰箱里面。1.2小时常温放置一般不会影响其电泳结果的。如果是长时间不继续往下做Z好放在零下20度保存,尽量减少反复冻融

二、pcr仪器各个温度的含义?

PCR仪的三种控温模式

在进行PCR仪中控温模式设定时,一般有三个选项:Block、Tube及Probe。下面就这三种模式种简单的介绍:

PCR仪的温度传感器一般是在模块下面的,也就是说仪器实际能够控制的是模块的温度,Block模式指的就是仪器以控制Block的温度为目的,也就是说你输入95度5分钟,则模块的温度达到95度后开始计时,5分钟后完成。这是zui基本的控温模式。

但是,实际上我们输入95度5分钟是希望PCR管内的温度达到95后开始计时5分钟。PCR仪器开发人员可以先将模块温度控制到97度(比如而已,如果不超过95度,管内温度可以很长时间才能达到95度或根本达不到),过几秒钟后,等到管内温度达到95度,再将模块温度降到95度。这样做既达到了管内温度到95度,且速度较快。但过冲的温度量与时间及PCR管的导热系数、PCR反应液的体积都有关系。这就是各个PCR仪厂家的核心技术了。这种控温方式就称为Tube模式。

如果直接将一个温度传感器加入PCR管中,直接测量PCR管内的温度不是也可以吗?这就是Probe模式,也就是在一个不进行PCR反应的管内放入一个温度探头,仪器根据温度探头测到的温度来控制PCR管内的温度。但传感器的数据检测、分析及反馈是需要时间的,这种控制模式不一定比Tube模式好,而且如果反应体积发生变化时,就比较麻烦了。

因此,如今的PCR仪就都是Block和Tube两种模式了。如果是正常的PCR反应,一般选Tube模式。如果是长时间保温且对温度过冲要求很高,则可以考虑用Block模式。

三、pcr仪设置温度原理?

在pcr反应过程中,要使用三个不同的温度变化,有变性,退火,扩增三个不同的反应阶段,而这三个反应需要的最适温度不同。具体设置如下:

1、变性反应温度的设置

当温度控制在90 °C以上时DNA会发生变性,双链DNA解链成单链。

2、退火反应温度的设置

当温度下降到50 °C的时候,DNA复性,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。

3、扩增反应温度的设置

当温度上升到72 °C左右时延伸,DNA 聚合酶在此时有最大活性,能够催化4 种脱氧核苷酸合成新的DNA链。

四、pcr温度变化程序和作用?

pcr技术核心是利用DNA聚合酶,通过温度变化确保引物与模板同源配对,以四种脱氧核糖核苷酸为原料合成目标DNA。pcr技术有三次温度变化处理,其作用分别是:

1. 94~98℃处理,促进模板DNA变性,由双链DNA变成单链DNA;

2. 52~65℃处理,降温退火处理,促进变性的DNA与引物通过碱基互补配对,形成引物与模板结合的复合物,为聚合酶扩增奠定基础;

3. 65~72℃处理,延伸阶段,DNA聚合酶以引物为合成起始,通过与模板碱基配对,合成DNA。

五、pcr仪怎么打开仪器就热盖?

那是因为程序已经设定为开机热盖,不需要热盖的需要重新设定程序。

六、pcr仪怎么设置温度降落?

一般退火温度为从Tm+5度降落至Tm-10度,每度2个cycle,最后在tm-10度上增加5-10个cycle.例:Tm为58度,则从63度降落到48度,每度2个cycles,最后在48度加5-10个cycles。如果效果不好,可以再微调。

七、pcr结束后如何正确保持pcr产物?

pcr结束后正确保持pcr产物分如下几种方法

1.pcr时往往不太可能即使取出pcr产物,因此,在pcr程序的最后通常会设定4~15℃ 永远这道程序,使pcr扩增完成后将产物保持在4~15℃。

2.获得pcr产物,凝胶电泳证明扩增正确后,一般用采用纯化试剂盒对pcr产物进行纯化,然后溶解在TE缓冲液,-20℃或-70℃冷冻保存;

3.如果需要长期保存,建议将纯化的pcr产物进行酒精沉淀,干燥冷冻保存可以保存非常久。

八、pcr结束后引物还要吗?

PCR技术中复制完成不会切除引物,随着反应的继续,加入PCR反应管中的引物会不断地被消耗1.如果没有人为的去掉引物,“引物”还在。 2.理论上PCR可以用DNA或RNA为引物,但至今没有一个实验室用RNA的,原因是RNA酶无处不在(如讲话时唾沫一喷),RNA随时被分解。

九、pcr结束后可以过夜吗?

答:可以过夜。

原因:pcr是一种在体外扩增或检测目的基因的一种方法。pcr结束以后反应液中主要的成分就是扩增完后的目地基因,都是双链DNA,双链DNA无论是在四度还是在室温下都是很稳定的,过夜存放并不会对扩增后的产物有什么影响。

十、伯乐pcr仪怎么设置降落程序?

一般退火温度为从Tm+5度降落至Tm-10度,每度2个cycle,最后在tm-10度上增加5-10个cycle.例:Tm为58度,则从63度降落到48度,每度2个cycles,最后在48度加5-10个cycles。如果效果不好,可以再微调。

The End
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