一、pcr仪器各个温度的含义？
PCR仪的三种控温模式
在进行PCR仪中控温模式设定时，一般有三个选项：Block、Tube及Probe。下面就这三种模式种简单的介绍：
PCR仪的温度传感器一般是在模块下面的，也就是说仪器实际能够控制的是模块的温度，Block模式指的就是仪器以控制Block的温度为目的，也就是说你输入95度5分钟，则模块的温度达到95度后开始计时，5分钟后完成。这是zui基本的控温模式。
但是，实际上我们输入95度5分钟是希望PCR管内的温度达到95后开始计时5分钟。PCR仪器开发人员可以先将模块温度控制到97度（比如而已，如果不超过95度，管内温度可以很长时间才能达到95度或根本达不到），过几秒钟后，等到管内温度达到95度，再将模块温度降到95度。这样做既达到了管内温度到95度，且速度较快。但过冲的温度量与时间及PCR管的导热系数、PCR反应液的体积都有关系。这就是各个PCR仪厂家的核心技术了。这种控温方式就称为Tube模式。
如果直接将一个温度传感器加入PCR管中，直接测量PCR管内的温度不是也可以吗？这就是Probe模式，也就是在一个不进行PCR反应的管内放入一个温度探头，仪器根据温度探头测到的温度来控制PCR管内的温度。但传感器的数据检测、分析及反馈是需要时间的，这种控制模式不一定比Tube模式好，而且如果反应体积发生变化时，就比较麻烦了。
因此，如今的PCR仪就都是Block和Tube两种模式了。如果是正常的PCR反应，一般选Tube模式。如果是长时间保温且对温度过冲要求很高，则可以考虑用Block模式。
二、pcr仪盖子的温度如何设置？
现在pcr仪一般都是热盖pcr仪。热盖的作用是无需加石蜡即可启动pcr反应，其原理是通过加热热盖使pcr tube的盖子达到恒定高温，从而防止pcr过程中反复加热和降温导致tube中的水蒸气冷凝，而导致反应体系中的的水分挥发蒸干，破坏反应体系，影响扩增结果。同时，避免了加入石蜡对pcr后期纯化处理的麻烦。
根据热盖的作用，不难看出热盖的温度略高于水的沸点即可，常规温度设置为105～110度。
三、pcr温度梯度设置？
温度梯度pcr一般主要是指退火温度梯度。如果PCR仪支持的话，一次可以做好几个温度梯度，象AIB的可以做六个，而有些公司的是模仿梯度，比如一边高一边低，这样梯度温度可能误差大一点。如果仪器不支持，可能就麻烦了，想做六个温度就得做六次PCR了。每一次设成不同的温度。
四、pcr仪设置温度原理？
在pcr反应过程中，要使用三个不同的温度变化，有变性，退火，扩增三个不同的反应阶段，而这三个反应需要的最适温度不同。具体设置如下：
1、变性反应温度的设置
当温度控制在90 °C以上时DNA会发生变性，双链DNA解链成单链。
2、退火反应温度的设置
当温度下降到50 °C的时候，DNA复性，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。
3、扩增反应温度的设置
当温度上升到72 °C左右时延伸，DNA 聚合酶在此时有最大活性，能够催化4 种脱氧核苷酸合成新的DNA链。
五、pcr仪怎么设置温度降落？
一般退火温度为从Tm+5度降落至Tm-10度，每度2个cycle，最后在tm-10度上增加5-10个cycle.例：Tm为58度，则从63度降落到48度，每度2个cycles,最后在48度加5-10个cycles。如果效果不好，可以再微调。
六、pcr延伸温度如何确定？
延伸需要复性，下降到50℃左右。
七、PCR实验温度如何设计？
室内设计温度
1)、温度控制：根据细胞的适宜生长温度，温度控制在 25℃以下，考虑温度的浮动范围，保证温度在 23℃左右，为满足温度要求，具体措施：采用组合式空调机组，对室内进行补新风通风，空调器的冷热源采用循环式温控系统，冬季适当减少排风量，以减小能耗，同时送风直接到工作人员区域，保证工作人员的舒适的工作环境。
2） 湿度控制：根据对湿度条件的依赖特点，控制湿度在 30%～70℃ 左右。
3） 杀菌措施：在室内设置紫外杀菌灯对可能存在的菌种进行灭活处理。
八、pcr延伸温度如何计算？
引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。
PCR的过程：
1、DNA变性：（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA
2、退火：（60℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。
3、延伸：（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸，合成与模板互补的DNA链。
九、pcr退火温度如何确定？
退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8） 只是粗算，有时不灵，但比较简便。
用primer5（or oligo6）计算，引物配对好后，primer5可以显示Tm，我认为这个值就是退火温度，我的经验再加2 or 3度最好。
十、PCR仪如何设置？
1、按 PCR 仪正面左下角电源开关，启动 PCR 仪。
2、放 PCR 离心管，先把顶盖向上扳，再往前推，露出放样孔，PCR 管
放入前应加好反应体系各组分，再放入 PCR 离心管。
3、反向重复第二步骤将顶盖板向后拉，盖好顶盖。
4、按 F2“Create”新建一个扩增的 PCR 程序。
5、按控制台面右方上下左右方向键，可随意移动编辑位置，输入需要
的温度、时间、循环数等。
6、据 PCR 离心管中加入的反应体积总量，在“Reaction volume”后输入
相应数值，有 Std“1～100ul”和 9600“1~50ul”两档可供选择。
7、按 F1“Start”启动
8、按“INFO”对应键查看 PCR 结束键。
9、扩增完成后按台面左方“Stop”键退出。
10、按“Hist”，可查看上次扩增的历史记录。11、完全退出后，按台面左下方电源开关，拔出插销，切断电源。