一、pcr仪器各个温度的含义?
PCR仪的三种控温模式
在进行PCR仪中控温模式设定时,一般有三个选项:Block、Tube及Probe。下面就这三种模式种简单的介绍:
PCR仪的温度传感器一般是在模块下面的,也就是说仪器实际能够控制的是模块的温度,Block模式指的就是仪器以控制Block的温度为目的,也就是说你输入95度5分钟,则模块的温度达到95度后开始计时,5分钟后完成。这是zui基本的控温模式。
但是,实际上我们输入95度5分钟是希望PCR管内的温度达到95后开始计时5分钟。PCR仪器开发人员可以先将模块温度控制到97度(比如而已,如果不超过95度,管内温度可以很长时间才能达到95度或根本达不到),过几秒钟后,等到管内温度达到95度,再将模块温度降到95度。这样做既达到了管内温度到95度,且速度较快。但过冲的温度量与时间及PCR管的导热系数、PCR反应液的体积都有关系。这就是各个PCR仪厂家的核心技术了。这种控温方式就称为Tube模式。
如果直接将一个温度传感器加入PCR管中,直接测量PCR管内的温度不是也可以吗?这就是Probe模式,也就是在一个不进行PCR反应的管内放入一个温度探头,仪器根据温度探头测到的温度来控制PCR管内的温度。但传感器的数据检测、分析及反馈是需要时间的,这种控制模式不一定比Tube模式好,而且如果反应体积发生变化时,就比较麻烦了。
因此,如今的PCR仪就都是Block和Tube两种模式了。如果是正常的PCR反应,一般选Tube模式。如果是长时间保温且对温度过冲要求很高,则可以考虑用Block模式。
二、PCR实验温度如何设计?
室内设计温度
1)、温度控制:根据细胞的适宜生长温度,温度控制在 25℃以下,考虑温度的浮动范围,保证温度在 23℃左右,为满足温度要求,具体措施:采用组合式空调机组,对室内进行补新风通风,空调器的冷热源采用循环式温控系统,冬季适当减少排风量,以减小能耗,同时送风直接到工作人员区域,保证工作人员的舒适的工作环境。
2) 湿度控制:根据对湿度条件的依赖特点,控制湿度在 30%~70℃ 左右。
3) 杀菌措施:在室内设置紫外杀菌灯对可能存在的菌种进行灭活处理。
三、做PCR实验需要准备哪些实验耗材?
PCR实验需要准备以下实验耗材:1. PCR试剂盒:PCR反应的关键试剂,包括聚合酶、引物和反应缓冲液等,用于DNA模板的扩增。
2. 高纯度DNA模板:用于PCR扩增的起始材料,可以是基因组DNA或者cDNA等。
3. 引物:PCR反应中的引物,用于定向扩增目标序列,一般需要设计两个引物,分别位于目标序列的起始位点和终止位点。
4. 脱氧核苷酸三磷酸(dNTPs):DNA聚合酶合成新链所需的四种脱氧核苷酸。
5. MgCl2:提供PCR反应中的镁离子,是聚合酶活性的必需因子。
6. 缓冲液:维持PCR反应的酸碱度和离子平衡,保证反应的稳定性。
7. 管式PCR试管:用于PCR反应体系的搭建和操作,一般是薄壁、透明的管式试管。
8. 热循环仪:PCR反应的核心仪器,用于控制反应温度和时间的变化,使PCR反应按程序进行。
总结:做PCR实验需要准备PCR试剂盒、高纯度DNA模板、引物、dNTPs、MgCl2、缓冲液、管式PCR试管和热循环仪等实验耗材。
这些耗材能够满足PCR反应的各项要求,并实现DNA模板的扩增。
四、一个实验室需要几台PCR仪器?
一般情况下需要三台。因为有的时候样品比较多,需要占用多台,而且实验室会有很多人都需要用,所以三台基本可以满足要求。
五、PCR实验室对温度的要求?
控温25度,我觉得控湿也很关键,湿度太大的时候经常会污染
六、pcr预备实验怎么做的?
1.
在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中.10*PCR buffer5 μl dNTP mix (2mM)4 μl 引物1(10pM)2 μl 引物2(10pM)2 μl Taq酶 (2U/μl)1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)1 μl 加ddH2O至 50 μl视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油.
2.
调整好反应程序.将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增.一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,最后在72℃ 保温7min.
3.
结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存.
七、不同化学实验仪器加热温度分别是多少?
塑料制品,温度在80度以下。
玻璃器皿一般控制在300度以下。
陶瓷器皿,例如坩埚,我们一般用在500度以下,虽然马弗炉可以到1000度。石棉是可以用到1000度的。
金属制品,很少加热,烫手,最多用酒精灯烧一下,刮刀前端什么的。
电子器械,看原理,水浴100,油浴300,紫外红外旋光在室温,质谱300~350度,核磁液氮低温……
八、pcr实验中连接温度高有影响吗?
因为高温环境对酶的活性有影响。此步若不能使靶基因模板或PCR产物完全变性,就会导致PCR失败。变性温度低,解链不完全是导致PCR失败的最主要原因。一般情况下,93℃~94℃min足以使模板DNA变性,若低于93℃则需延长时间,但温度不能过高。
九、做实验的仪器有哪些?
做实验的仪器有:酒精灯,试管,烧杯,蒸发皿等等。
十、pcr条带浅应该如何调退火温度?
PCR中退火的那步是引物与模板结合,一般来说,退火温度比Tm值要低上5度左右。另外,也可以根据你设计引物的软件比如primer5.0或Olige 6 推荐的温度。但这些都不是绝对的。
你要是在他的推荐温度下没有目的条带,你可以试试做一个温度梯度,摸索一下退火温度。