一、pcr仪器各个温度的含义?
PCR仪的三种控温模式
在进行PCR仪中控温模式设定时,一般有三个选项:Block、Tube及Probe。下面就这三种模式种简单的介绍:
PCR仪的温度传感器一般是在模块下面的,也就是说仪器实际能够控制的是模块的温度,Block模式指的就是仪器以控制Block的温度为目的,也就是说你输入95度5分钟,则模块的温度达到95度后开始计时,5分钟后完成。这是zui基本的控温模式。
但是,实际上我们输入95度5分钟是希望PCR管内的温度达到95后开始计时5分钟。PCR仪器开发人员可以先将模块温度控制到97度(比如而已,如果不超过95度,管内温度可以很长时间才能达到95度或根本达不到),过几秒钟后,等到管内温度达到95度,再将模块温度降到95度。这样做既达到了管内温度到95度,且速度较快。但过冲的温度量与时间及PCR管的导热系数、PCR反应液的体积都有关系。这就是各个PCR仪厂家的核心技术了。这种控温方式就称为Tube模式。
如果直接将一个温度传感器加入PCR管中,直接测量PCR管内的温度不是也可以吗?这就是Probe模式,也就是在一个不进行PCR反应的管内放入一个温度探头,仪器根据温度探头测到的温度来控制PCR管内的温度。但传感器的数据检测、分析及反馈是需要时间的,这种控制模式不一定比Tube模式好,而且如果反应体积发生变化时,就比较麻烦了。
因此,如今的PCR仪就都是Block和Tube两种模式了。如果是正常的PCR反应,一般选Tube模式。如果是长时间保温且对温度过冲要求很高,则可以考虑用Block模式。
二、pcr温度周期性变化的目的?
pcr技术有三次温度变化处理,其作用分别是:
1. 94~98℃处理,促进模板DNA变性,由双链DNA变成单链DNA;
2. 52~65℃处理,降温退火处理,促进变性的DNA与引物通过碱基互补配对,形成引物与模板结合的复合物,为聚合酶扩增奠定基础;
3. 65~72℃处理,延伸阶段,DNA聚合酶以引物为合成起始,通过与模板碱基配对,合成DNA。
dna复制需要预变性,退火和延伸几个过程,每个过程都对应着一个温度,所以pcr温度需要周期性的变化,每一个周期就是一个循环。
三、pcr技术的温度?
PCR退火温度是一个范围,一般是50度到65度,或者到70度做两步法PCR
四、abi pcr仪器是什么品牌的?
abi pcr仪器是美国ABI公司的品牌,Pcr分析仪。
美国ABI公司 ,全称 Applied Biosystems,中文翻译为“美国应用生物系统公司",是一家全球知名的跨国PCR仪生产厂商,生产了世界上第一台PCR仪,第一台定量PCR仪。
美国ABI公司于2006年7月20日进入中国,成立分公司,称为“爱普拜斯应用生物系统贸易(上海)有限公司”。
五、溶液均一性的特征?
溶液均一性
溶液的各部分性质完全相同 在外界环境不变的情况下,溶液的各成分不发生分离现象
六、pcr的重要性?
PCR能快速特异扩增任何已知目的基因或DNA片段,并能轻易在皮克(pg)水平起始DNA混合物中的目的基因扩增达到纳克、微克、毫克级的特异性DNA片段。
PCR技术广泛地用于分子生物学的各个领域。它不仅可以用于基因的分离、克隆和核苷酸序列分析,还可以用于突变体和重组体的构建,基因表达调控的研究,基因多态性的分析,遗传病和传染病的诊断,肿瘤机制的探索。
七、pcr技术的高效性?
pcr检测技术现在被广泛应用于突发公共卫生事件的快速检测,因为它有1.高灵敏度:最小能检出3个细菌,3病毒空斑形成单位也能检出;
2.高特异性;
3.方法简便快捷,实时荧光定量PCR能在1h左右获得实验结果;
4.对样本的纯度要求低及适用范围广,所以对于疾病预防控制、突发公共卫生事件处理具有重要意义。
八、pcr仪器热盖是怎么加热的?
PCR仪的热盖大致可以分为以下四种:非可调式热盖、可调节式热盖、自适应式热盖和自动式热盖
1、非可调式热盖:即热盖并不能同时适用于高管和矮管,如AB的2720等只能用高管,用矮管得手工加铝块;
2、可调节式热盖:即热盖的高度可以手工调节,同时适用于各种高管和矮管,但压力需要自己感觉,用力过小或过大都可能会有麻烦,如MJ公司的PTC200。因为有这个问题,后来又出了力矩式可调热盖,即热盖旋转到一定力矩后内置机构打滑,从而保证一定的热盖压力。如东胜龙的黑金刚以及Biometra等。这类热盖打开前最好旋松热盖,否则下一个用户如果直接下压热盖,可能造成部分PCR管变型。但很多用户会忘记松热盖。
3、自适应式热盖:即热盖自带预压紧的弹簧,通过与打开和关闭热盖的手柄机构相结合,达到压手柄时自动压紧热盖,开手柄时自动松开热盖,自适应高管和矮管,不用担心压力和没有松开热盖等问题。如东胜龙二代的ETC811型PCR仪。
4、自动式热盖:即热盖是由电机来控制的压紧与松开的。一般用于与实验室自动化相配合的PCR仪,或称为全自动PCR仪,如原MJ公司以及Biometra公司都此类PCR仪,但价格都较高。
九、pcr检测的准确性?
准确性还是比较高的,如果不放心的情况下,建议可以做进一步的检查,尿道拭子pcr的检查方式是取一些尿道分泌物,然后进行支原体培养和药敏试验,在这个试验前的4个小时以内不要小便,需要通过两次的测试,这样准确率是非常高的,大概1~2天就能够知道检查结果。
十、PCR的退火温度怎么设定?
PCR中退火的那步是引物与模板结合,一般来说,退火温度比Tm值要低上5度左右。另外,也可以根据你设计引物的软件比如primer5.0或Olige 6 推荐的温度。但这些都不是绝对的。
你要是在他的推荐温度下没有目的条带,你可以试试做一个温度梯度,摸索一下退火温度。