pcr仪器各个温度的含义?

admin 泰里仪器网 2024-10-25 21:21 0 阅读

一、pcr仪器各个温度的含义?

PCR仪的三种控温模式

在进行PCR仪中控温模式设定时,一般有三个选项:Block、Tube及Probe。下面就这三种模式种简单的介绍:

PCR仪的温度传感器一般是在模块下面的,也就是说仪器实际能够控制的是模块的温度,Block模式指的就是仪器以控制Block的温度为目的,也就是说你输入95度5分钟,则模块的温度达到95度后开始计时,5分钟后完成。这是zui基本的控温模式。

但是,实际上我们输入95度5分钟是希望PCR管内的温度达到95后开始计时5分钟。PCR仪器开发人员可以先将模块温度控制到97度(比如而已,如果不超过95度,管内温度可以很长时间才能达到95度或根本达不到),过几秒钟后,等到管内温度达到95度,再将模块温度降到95度。这样做既达到了管内温度到95度,且速度较快。但过冲的温度量与时间及PCR管的导热系数、PCR反应液的体积都有关系。这就是各个PCR仪厂家的核心技术了。这种控温方式就称为Tube模式。

如果直接将一个温度传感器加入PCR管中,直接测量PCR管内的温度不是也可以吗?这就是Probe模式,也就是在一个不进行PCR反应的管内放入一个温度探头,仪器根据温度探头测到的温度来控制PCR管内的温度。但传感器的数据检测、分析及反馈是需要时间的,这种控制模式不一定比Tube模式好,而且如果反应体积发生变化时,就比较麻烦了。

因此,如今的PCR仪就都是Block和Tube两种模式了。如果是正常的PCR反应,一般选Tube模式。如果是长时间保温且对温度过冲要求很高,则可以考虑用Block模式。

二、清洁仪器的使用步骤?

首先,确认清洁仪器的电源和水源是否正常。

其次,将清洁剂加入清洁仪器中,注意清洁剂的浓度和使用量。

接着,打开清洁仪器并设置合适的清洗时间和温度,将需要清洁的物品放入清洁仪器中。

清洗结束后,将物品取出并用清水进行冲洗,确保清洁剂完全清除。

最后,关闭清洁仪器并清洁器内部,以保持清洁仪器的卫生。在使用过程中,应注意安全,遵守清洁仪器的使用说明书。

三、rtk仪器使用操作的步骤?

rtk测量仪器是目前普及很广的测绘仪器,这款测绘仪器用起来很方便,且测绘速度也是非常快的。不仅如此,rtk测量仪由于重量非常轻,深得测绘人员的喜爱。而对于刚刚接触rtk测绘仪的工作者,该如何熟练使用呢?今天,给大家说一说rtk测量仪器使用方法。

rtk测量仪器

1.RTK使用有外置网络和内置网络两种接收方式。外置网络要加设发射电台。用内置网络的话就用流量卡或者电话卡就行。架设好基站后,就可开始开机设置基站了,先是平滑好基站,平滑好后先看基站有没发射信号。一般连上了会正常发射信号。然后开启移动站RTK,设置好同频道跟主机站一样。等移动站收到信号固定好后就可进行下一步工作了。

2.首先建个当天的文件,建好文件后就去测控制点,测好点后在手簿中输入原始控制点。然后在参数计算中算好参数。当参数没问题时就可保存设置了。下一步就可以开始测量了。我们平时一般能收到的卫星有几十颗。如果有八颗以上的共同卫星就会是固定解,可以正常测量,如果是浮动解后者是伪距,单点解是不可以测点的。测出的数据差好远。这是RTK的正常用法。

四、pcr技术的温度?

PCR退火温度是一个范围,一般是50度到65度,或者到70度做两步法PCR

五、abi pcr仪器是什么品牌的?

abi pcr仪器是美国ABI公司的品牌,Pcr分析仪。

美国ABI公司 ,全称 Applied Biosystems,中文翻译为“美国应用生物系统公司",是一家全球知名的跨国PCR仪生产厂商,生产了世界上第一台PCR仪,第一台定量PCR仪。

美国ABI公司于2006年7月20日进入中国,成立分公司,称为“爱普拜斯应用生物系统贸易(上海)有限公司”。

六、pcr的五个步骤?

PCR反应程序指的是:PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成:

1、模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;

2、模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;

3、延伸:DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。

该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。

传统的Taq估计合成1000bp大概需要1分钟、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。有修正功能的则会比较慢。

七、pcr的4个步骤?

主要步骤是:

1.将待扩增的模板DNA置高温下(通常为93℃-94℃)使其变性解成单链;

2.人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合,两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短;

3.耐热的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入

4.以目的基因为模板从5’→3’方向延伸,合成DNA的新互补链。

八、韩国黑棕仪器使用步骤?

1、确认所有端口的电缆及电源是否正确

  2、使用前摘掉首饰品等

  3、不使用仪器时请关闭电源

  4、湿棉花缠在离子镊子,使用完后请清除

  5、皮肤敏感人或接触性皮肤炎顾客请禁止使用

  6、请正确了解手册中的各项目内容后使用仪器

  7、人工心脏器使用者及患有心脏病者慎用

  8、孕妇建议只使用于面部

  9、管理部位硅胶及其他物质插入者慎用

  10、各种皮肤病患者及身体不适患者慎用

  11、使用喷氧后请及时用温水清理,避免管道堵塞

九、pcr仪器热盖是怎么加热的?

PCR仪的热盖大致可以分为以下四种:非可调式热盖、可调节式热盖、自适应式热盖和自动式热盖

1、非可调式热盖:即热盖并不能同时适用于高管和矮管,如AB的2720等只能用高管,用矮管得手工加铝块;

 2、可调节式热盖:即热盖的高度可以手工调节,同时适用于各种高管和矮管,但压力需要自己感觉,用力过小或过大都可能会有麻烦,如MJ公司的PTC200。因为有这个问题,后来又出了力矩式可调热盖,即热盖旋转到一定力矩后内置机构打滑,从而保证一定的热盖压力。如东胜龙的黑金刚以及Biometra等。这类热盖打开前最好旋松热盖,否则下一个用户如果直接下压热盖,可能造成部分PCR管变型。但很多用户会忘记松热盖。

 3、自适应式热盖:即热盖自带预压紧的弹簧,通过与打开和关闭热盖的手柄机构相结合,达到压手柄时自动压紧热盖,开手柄时自动松开热盖,自适应高管和矮管,不用担心压力和没有松开热盖等问题。如东胜龙二代的ETC811型PCR仪。

 4、自动式热盖:即热盖是由电机来控制的压紧与松开的。一般用于与实验室自动化相配合的PCR仪,或称为全自动PCR仪,如原MJ公司以及Biometra公司都此类PCR仪,但价格都较高。

十、pcr技术的原理和步骤?

PCR技术原理和操作

PCR技术是指,在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。

一、PCR技术的基本原理和操作

1、PCR反应的成分和作用

总体积:一般为25μl~100 μl

(一)Mg2+:终浓度为1。5~2。0mmol/L,其对应dNTP为200 μmol/L,注意Mg2+与dNTPs之间的浓度关系,由于dNTP与Taq酶竟争Mg2+,当dNTP浓度达到1 mmol/L时会YZTaq酶的活性。 Mg2+能影响反应的特异性和产率。

(二)无Mg2+buffer:由纯水、kcl、Tris组成。Tris用于调节反应体系pH值,使Taq酶在偏碱性环境中反挥活性。kcl可降低退火温度,但不能超过50 mmol/L,否则会YZDNA聚合酶活性。

(三)BSA:一般用乙酰化的BSA,起着减少PCR管对Taq酶的吸附作用,对Taq酶有保护作用。

(四)底物(dNTPs):dNTPs具有较强酸性,其储存液用NaOH调pH值至7。0~7。5,一般存储浓度为 10 mmol/L,各成份以等当量配制,反应终浓度为20~200μmol/L。高浓度可加速反应,但同时增加错误掺入和实验成本;低浓度可提高精确性,而反应速度会降低。

(五)Taq酶:能耐95℃高温而不失活,其Z适pH值为8。3~8。5,Z适温度为75~80℃,一般用72℃。能催化以DNA单链为模板,以碱基互补原则为基础,按5’→3’方向逐个将dNTP分子连接到引物的3’端,合成一条与模板DNA互补的新的DNA子链。无3’→5’的外切酶活性,没有校正功能。某种dNTP或Mg2+浓度过高,会增加其错配率。用量一般为0。5~5个单位/100μl。

(六)模板:PCR对模板DNA的纯度不要求很高,但应尽量不含有对PCR反应有YZ作用的杂质存在,如蛋白酶、核酸酶、TqaDNA聚合酶YZ剂、能与DNA结合的蛋白质。模板DNA的量不能太高,否则扩增可能不会成功,在此情况下可适当稀释模板。

(七)引物:引物浓度一般为0。1~0。5μmol/L,浓度过高会引起错配和非特异扩增,浓度过低则得不到产物或产量过低。引物长度一般15~30个碱基,引物过长或过短都会降低特异性。其3’末端一定要与模板DNA配对,末位碱基Z好选用A、C、G(因T错配也能引发链的延伸)。

引物G+C约占45~55%,碱基应尽量随机分布,避免嘧啶或嘌呤堆积,两引物之间不应有互补链存在,不能与非目的扩增区有同源性。

2、PCR反应步骤和反应条件选择(影响因素)

a、变性:模板变性完全与否是PCR成功的关键,一般先于94℃(或95℃)变性3~10min,接着94℃变性30~60s。

b、退火:退火温度一般低于引物本身变性温度5℃。引物长度在15~25bp可通过公Tm=(G+C)×4℃+(A+T)×2℃计算退火温度,一般退火温度在40~60℃之间,时间为30~45s。如果(G+C)低于50%,退火温度应低于55℃。较高的退火温度可提高反应的特异性。

c、延伸:延伸温度应在Taq酶的Z适温度范围之内,一般在70~75℃。延伸时间要根据DNA聚合酶的延伸速度和目的扩增片段的长度确定,通常对于1kb以内的片段1min是够用的。

以上述三个步骤为一个循环,每一循环的产物均可作为下一个循环的模板,经过n次循环后,目的DNA以2n的形式增加

The End
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