qpcr仪器用处?

admin 泰里仪器网 2024-11-12 23:26 0 阅读

一、qpcr仪器用处?

荧光定量PCR法(qPCR):是在常规PCR基础上,将『针对支原体特异性保守序列的探针』做荧光标记,使PCR扩增后的产物带有荧光,利用荧光信号的变化和配套软件,进行DNA扩增反应的实时监测,简称qPCR

二、qpcr仪器有哪些品牌?

市场上有的进⼝品牌的qPCR仪主要是这样⼏种哈:ABI、伯乐(Bio-Rad)、罗⽒(ROCHE)、安捷伦和Takara。国产的常见的是:杭州博⽇、上海宏⽯、杭州安杰思、西安天隆等等品牌。

我就选⼏个我⽤过的qPCR仪来分析⼀下,分别是:ABI-7500、Bio-Rad CFX96、ROCHE LightCycler® 480、上海宏⽯ SLAN48-P、杭州安杰思ADF9600。

三、qpcr 退火温度?

1、退火温度低于引物Tm值5 ℃左右,一般在45~55℃。退火温度需要从多方面去决定,一般根据引物的Tm值(Tm值=4(G+C) +2(A+T))为参考,根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对PCR的特异性有较大影响。

2、延伸时间:1min/kb(10kb内)。引物延伸一般在72℃进行(Taq酶最适温度)。但在扩增长度较短且退火温度较高时,本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定,一般推荐在1000bp以上,含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。扩展资料PCR的过程:1、DNA变性:(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA2、退火:(60℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。

3、延伸:(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸,合成与模板互补的DNA链。

四、qpcr退火温度怎么确定?

熔解温度(Tm)是引物的一个重要参数。这是当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定PCR退火温度是必需的。在理想状态下,退火温度足够低,以保证引物同目的序列有效退火, 同时还要足够高,以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的 Tm低5℃。 设定Tm有几种公式。有的是来源于高盐溶液中的杂交,适用于小于18碱基的引物。 有的是根据GC含量估算Tm。确定引物Tm最可信的方法是近邻分析法。这种方法从序列一级结构和相邻碱基的特性预测引物的杂交稳定性。大部分计算机程序使用近邻分析法。 根据所使用的公式及引物序列的不同,Tm会差异很大。因为大部分公式提供一个估算的Tm值,所有退火温度只是一个起始点。可以通过分析几个逐步提高退火温度的反应以提高特异性。开始低于估算的Tm5℃,以2℃为增量,逐步提高退火温度。较高的退火温度会减少引物二聚体和非特异性产物的形成。 为获得最佳结果,两个引物应具有近似的Tm值。引物对的Tm差异如果超过5℃,就会引物在循环中使用较低的退火温度而表现出明显的错误起始。如果两个引物Tm不同,将退火温度设定为比最低的Tm低5℃ 或者为了提高特异性,可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环,然后在根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。这使得在较为严紧的条件下可以获得目的模板的部分拷贝。

五、伯乐仪器qpcr仪连接不上电脑?

几种可能:

1.检测仪的检测插头与车辆检测座接触不良,清除干净插头和检测座再试;

2.仪器软件内部故障,对仪器进行升级后再测,仍无法检测可与厂家联系处理;

3.检测仪、数据线、检测插头、车辆检测座未正确连接,重新检查连接

六、qpcr仪器反应体系选择有什么影响?

qPCR的体系配制其实与常规的PCR体系是类似的,也包含了buffer、dNTP、DNA聚合酶、引物及模板,不同的地方在于qPCR体系还多了荧光标记(如SYBR Green I或probe)。所有的组分都要提供浓度信息,这对重复qPCR实验至关重要。Buffer中除了缓冲成分,最重要的就是Mg2+,是DNA聚合酶活性的必要条件。

DNA聚合酶除了浓度信息之外还要提供使用的聚合酶名称,如常规的Taq酶或者经过基因改造后具有更多其他特性的聚合酶,使用不同的酶做出的实验结果也不尽相同。引物的使用终浓度一般在100-600nM,探针的使用终浓度一般在200-400 nM。浓度太高易出现非特异扩增,太低则导致过低的扩增效率;因此最佳浓度要根据自己的实验来定,推荐前期预实验可以做一下浓度梯度的探索。

目前,大部分的qPCR实验都会选择使用各种kit,一般会提供2 x qPCR mix,里面预混了DNA聚合酶、SYBR Green I(染料法)、buffer、Mg2+和dNTP等,用户只需要加引物和模板即可。Kit说明书中一般不会提供各个组分的浓度信息,这种情况下,要备注kit的名称及生产厂家,同时,如果不是参照说明书中的配制方法,则要对改动的地方加以说明。

qPCR反应体系中有可能会用到各种添加剂,如DMSO、甜菜碱和BSA等,无非是要提高扩增效率或者反应特异性,如果用到添加剂也要备注工作浓度。值得注意的是有些添加剂对聚合酶是有毒性的,要在其正面和负面作用之间取得平衡,浓度梯度实验是有效的方法之一。

qPCR的反应体系一般在20-50 μl,常规采用20μl。尽量不要使用10 μl体系,加样不易控制且容易挥发,造成variation变大。

耗材及仪器

qPCR板材往往是实验者容易忽略的点。当采用96孔板时,要注意qPCR仪器的兼容类型:全裙边、半裙边及无裙边等。更推荐使用白色管而非透明管,这是因为白色对荧光的反射更彻底,反映在结果上是Cq值更小,从而一定程度上提高了检测的灵敏度,但要注意这对扩增效率是没有影响的[1]。唯一的弊端就是,看不到加样位置,也无法辨别是否有气泡,所以使用白色管时检测前要高速离心。

封膜也是要注意的细节,尽量采用热封,而不要使用粘性膜。手工封膜有可能密封不严,导致技术学重复之间的variation比较大。

qPCR仪器种类繁多,国产的,进口的,深孔的,常规的,等等。要备注使用的仪器型号及生产厂家,这是因为不同的设备做出来的结果很有可能是不同的。特别要注意的是,不同设备做出来的Cq值是没有可比性的,不能通过单纯比较Cq的大小来评判设备的灵敏度等性能指标,而要综合标准曲线等其他因素来衡量。

七、qpcr melt curve怎么设置温度?

一般染料法定量pcr在进行完pcr后都要运行熔解曲线,一般设定先94度几分钟,然后骤冷到65度(假定65度为退伙温度).在65度时,pcr产物是以双链的形式存在的。  因为染料是插到双链dna的小沟里然后发荧光的,所以这个时候检测到很强的光信号,随着温度升高,双链逐渐打开,荧光信号逐渐减弱。

八、保鲜温度设定

如何正确设置食品保鲜温度设定?

在我们日常生活中,保持食物的新鲜和品质是非常重要的。其中一个关键因素是正确设置食品保鲜温度。食物的保存温度可以影响其寿命和风味。本文将向您介绍如何正确设置食品保鲜温度设定,以确保食物的新鲜和安全。

1. 冷藏温度设定

首先,让我们来讨论冷藏食物的温度设定。一般来说,冷藏食品的推荐温度为2℃至4℃。在这个温度范围内,绝大多数食物可以保持新鲜和安全。您可以调整冰箱的温度设置,确保它保持在这个范围内。

然而,有一些特殊的食物需要不同的温度设定。例如,家禽、肉类和鱼类应该在较低的温度下保存,通常在0℃至2℃。这可以帮助延长它们的保质期,并减少细菌生长的风险。

此外,一些蔬菜和水果需要较高的冷藏温度。例如,番茄、黄瓜和西葫芦应该在7℃至10℃的范围内保存。在这个温度下,它们可以保持新鲜和脆嫩。

2. 冷冻温度设定

对于需要长时间保存的食物,冷冻是一个不错的选择。正确的冷冻温度设定可以确保食物保持其质量和口感,同时减少食物中的水分丢失。

通常,冷冻食品的推荐温度为-18℃。在-18℃以下的温度下,大多数细菌和微生物无法生存。这是为什么冷冻能够有效延长食物的保质期的原因。

然而,有一些食物需要更低的冷冻温度。例如,冰淇淋和冷冻肉类应该在-20℃以下保存,以防止它们的质地变硬。

3. 注意事项

在设置食品保鲜温度设定时,还需要注意以下事项:

  • 搁置位置:确保食物在冰箱或冷冻室中处于正确的位置。避免将食物放置在温度较高的区域,例如门的附近。
  • 包装:正确包装和密封食物可以帮助保持其新鲜和防止异味传播。
  • 调整:在天气变化或季节变换时,您可能需要调整冰箱的温度设定,以适应环境变化。
  • 温度计:定期检查您的冰箱和冷冻室的温度,以确保它们保持在适当的范围内。购买一个温度计可以帮助您更好地掌控温度。

4. 结语

正确设置食品保鲜温度设定对于保持食物的新鲜和安全非常重要。根据食物的种类和需要,您可以调整冷藏和冷冻的温度设置。同时,还要注意食物的搁置位置、包装方式以及定期检查温度。通过正确的保鲜温度设定,您可以确保食物的品质,延长其保质期,并最大限度地减少浪费。

九、cpu和GPU温度设定

了解CPU和GPU温度设定的重要性

在现代计算机中,CPU和GPU是最重要的组成部分之一。CPU(中央处理器)负责计算和执行各种任务,而GPU(图形处理器)则负责处理图形和图像相关的内容。这两个组件的温度对计算机的性能和稳定性至关重要。

当CPU和GPU运行时,它们会产生大量的热量。如果温度过高,可能会导致隐患,如系统崩溃、性能下降以及硬件损坏。为了确保电脑正常运行,我们需要设置合适的温度阈值。

CPU温度设定

CPU温度是计算机运行过程中最重要的指标之一。合理的CPU温度可以确保计算机的稳定性、性能和寿命。通常来说,大多数CPU的安全运行温度在40°C至70°C之间。然而,不同的CPU型号和制造商可能会有一些差异,所以在设定温度之前,最好查阅相应的规格说明书。

为了设置CPU温度,我们可以使用多种方法。一种常见的方法是通过BIOS(基本输入/输出系统)进行设置。在电脑启动过程中,按下特定的按键(通常是Delete键或F2键)可以进入BIOS界面。在BIOS设置中,我们可以找到温度监测和调节选项。通过更改这些选项,我们可以调整CPU的工作温度。

此外,一些操作系统还提供了专门的软件来监测和调节CPU温度。例如,Windows操作系统提供了Power Plan功能,可以调整CPU的功耗和性能,从而影响温度。另外,一些第三方软件如CPU-Z、Core Temp等也可以在桌面上实时显示CPU温度,并允许用户进行调节。

GPU温度设定

与CPU类似,GPU温度的设定也是非常重要的。当我们运行需要大量图形处理的应用程序或游戏时,GPU的温度会上升。过高的温度可能导致画面延迟、崩溃甚至硬件损坏。

与CPU不同,大多数GPU温度是由显卡制造商预设的,而不是由用户设定。这是因为不同的显卡型号和制造商可能具有不同的设计规范和散热解决方案。通常来说,大多数显卡在80°C至90°C范围内是安全的工作温度。然而,对于一些高端显卡来说,它们可以承受更高的温度。

为了确保GPU温度在可接受的范围内,我们可以利用一些软件进行监测和调节。许多显卡制造商提供了自己的软件,如NVIDIA的NVIDIA Control Panel和AMD的Radeon Settings。这些软件允许用户监测GPU温度,并根据需要调整风扇速度和功耗。

此外,一些第三方软件如MSI Afterburner和EVGA Precision XOC也可以用于监测和调节GPU温度。这些软件通常提供更多高级的选项,如超频、电压调节等,以进一步优化显卡性能。

如何设置CPU和GPU温度

以下是设置CPU和GPU温度的一些建议:

  1. 保持良好的散热:确保计算机内部的空气流动良好,并清洁散热器和风扇。定期清洁电脑内部的灰尘,以确保散热效果。
  2. 选择合适的硬件:在购买计算机时,选择具有良好散热性能的CPU和GPU。一些高端组件通常配备更好的散热解决方案。
  3. 合理使用电脑:在运行大型应用程序或进行游戏时,尽量避免让CPU和GPU长时间处于满负荷。合理使用电脑并给予它们一些休息时间,有助于降低温度。
  4. 设定合适的温度阈值:根据CPU和GPU的规格,设定一个合适的温度阈值。当温度超过设定值时,系统可以自动降低性能或采取其他措施来降低温度。
  5. 定期监测温度:使用软件监测CPU和GPU温度,并及时采取措施,如调整风扇速度或关闭一些运行中的程序来降低温度。

总而言之,了解和设定CPU和GPU温度是确保计算机正常运行的重要一步。通过了解合适的温度范围,并采取适当的措施来调节温度,我们可以提高计算机的性能、稳定性和寿命。

十、保鲜柜怎么调温度设定温度

保鲜柜怎么调温度?设定温度的方法详解

保鲜柜是现代家居中常见的电器之一,它能够为我们提供理想的食材储存环境,延长食物的保鲜时间,保持其新鲜度和营养价值。然而,使用保鲜柜时,正确的温度设定是非常关键的。本文将详细介绍保鲜柜怎么调温度,以及设定温度的方法。

保鲜柜调温度的步骤

首先,在调整保鲜柜温度之前,我们需要了解不同食材对应的最佳储存温度。

  • 生鲜蔬菜:绝大多数蔬菜的最佳温度在0-7摄氏度之间。
  • 水果:大多数水果的最佳温度在8-12摄氏度之间。
  • 肉类:肉类的最佳温度在-1-3摄氏度之间。
  • 乳制品:乳制品的最佳温度在2-7摄氏度之间。
  • 海鲜:海鲜的最佳温度在0-4摄氏度之间。

接下来,根据食材的储存需求,我们可以将保鲜柜的温度设定为合适的数值。

保鲜柜调温度的具体步骤如下:

  1. 查看说明书:首先,打开你的保鲜柜说明书,了解该型号保鲜柜的温度调节方法和范围。
  2. 仔细观察:观察保鲜柜内部是否有温度调节面板,有的话,根据说明书上的指引,找到温度调节按钮或旋钮。
  3. 调节温度:根据前面提到的最佳储存温度,选择合适的温度数值。一般来说,保鲜柜温度的调节范围是-18摄氏度至10摄氏度。
  4. 等待稳定:调节完温度后,需要等待一段时间,让保鲜柜内部温度稳定下来,确保达到设定的温度。

保鲜柜设定温度的注意事项

在调节保鲜柜温度的过程中,还有一些额外的注意事项需要我们留意。

  • 避免频繁调节:保鲜柜的温度变化需要一定的时间,频繁调节温度会影响保鲜柜的性能,甚至对食材的保鲜效果造成影响,所以尽量避免频繁调节温度。
  • 合理分区:不同食材的最佳储存温度不同,因此,在使用保鲜柜时,可以根据实际需求合理划分存放区域,将食材分门别类放置,以充分利用保鲜柜的空间。
  • 定期清洁:保鲜柜是储存食材的地方,保持其清洁是非常重要的。定期清洁保鲜柜内部,清除残留的食物和污垢,能够更好地保持食材的新鲜度。
  • 定期检查:定期检查保鲜柜的温度是否稳定,是否出现异常。如果发现温度异常或其他问题,及时联系专业的维修人员进行处理。

综上所述,正确调节保鲜柜的温度能够保证食材的新鲜度和质量,延长其保鲜时间。在使用保鲜柜时,我们应该根据不同食材的最佳储存温度,通过仔细观察和调节温度面板,将保鲜柜的温度设定为合适的数值。同时,要注意避免频繁调节温度,合理分区存放食材,定期清洁和检查保鲜柜。只有这样,我们才能充分利用保鲜柜提供的优质储存环境,享受食材的新鲜和美味。

The End
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