一、pcr仪器各个温度的含义?
PCR仪的三种控温模式
在进行PCR仪中控温模式设定时,一般有三个选项:Block、Tube及Probe。下面就这三种模式种简单的介绍:
PCR仪的温度传感器一般是在模块下面的,也就是说仪器实际能够控制的是模块的温度,Block模式指的就是仪器以控制Block的温度为目的,也就是说你输入95度5分钟,则模块的温度达到95度后开始计时,5分钟后完成。这是zui基本的控温模式。
但是,实际上我们输入95度5分钟是希望PCR管内的温度达到95后开始计时5分钟。PCR仪器开发人员可以先将模块温度控制到97度(比如而已,如果不超过95度,管内温度可以很长时间才能达到95度或根本达不到),过几秒钟后,等到管内温度达到95度,再将模块温度降到95度。这样做既达到了管内温度到95度,且速度较快。但过冲的温度量与时间及PCR管的导热系数、PCR反应液的体积都有关系。这就是各个PCR仪厂家的核心技术了。这种控温方式就称为Tube模式。
如果直接将一个温度传感器加入PCR管中,直接测量PCR管内的温度不是也可以吗?这就是Probe模式,也就是在一个不进行PCR反应的管内放入一个温度探头,仪器根据温度探头测到的温度来控制PCR管内的温度。但传感器的数据检测、分析及反馈是需要时间的,这种控制模式不一定比Tube模式好,而且如果反应体积发生变化时,就比较麻烦了。
因此,如今的PCR仪就都是Block和Tube两种模式了。如果是正常的PCR反应,一般选Tube模式。如果是长时间保温且对温度过冲要求很高,则可以考虑用Block模式。
二、荧光定量pcr怎么设置退火温度?
最好也最快的方法是做个梯度PCR,马上能选出最优退火温度
三、荧光pcr原理?
荧光定量PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时, 探针结合在DNA任一一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
四、pcr仪器 全名?
pcr仪是光度计,
分光光度计,又称光谱仪(spectrometer),是将成分复杂的光,分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200~380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。
五、原位PCR和荧光PCR区别?
原位PCR (in situ PCR) 和荧光PCR (fluorescent PCR) 是两种常用的PCR方法,它们有以下几点区别:
1. 原理不同:原位PCR 是在细胞内进行PCR反应,而荧光PCR 是在体外进行PCR反应,然后使用荧光探针检测PCR产物。
2. 应用不同:原位PCR 主要用于检测单个细胞内的特定基因或DNA序列,而荧光PCR 主要用于定量PCR和检测PCR产物的存在或缺失。
3. 操作难度不同:原位PCR 操作相对复杂,需要适当的技术和经验,而荧光PCR 操作相对简单,适合于高通量实验。
4. 检测方式不同:原位PCR 通过显微镜观察细胞内PCR产物的信号,而荧光PCR 通过荧光信号检测PCR产物的存在或缺失。
总之,原位PCR 和荧光PCR 都是PCR技术的一种应用,其应用范围和操作方式不同,需要根据具体实验目的选择合适的方法。
六、ABI各型号荧光定量PCR仪器各有何优缺点?
进口的有:ABI的,BIO-RAD的iQ5 Applied Biosystems公司的7700型实时荧光定量PCR仪是全球公认的荧光定量PCR的金标准 BIONEER:国内的用户可能听说过这个品牌的不多,只有早期较多使用进口引物的实验室和研究所或留美学者知道这个品牌。
Bioneer最。七、荧光定量pcr原理?
荧光定量PCR是一种基于PCR技术的、灵敏、精确、可定量检测DNA的方法。其原理是,在PCR过程中加入荧光染料,当靶基因扩增到一定数量时,荧光信号达到了可检测的阈值,就可以通过荧光信号的强度来定量检测目标基因的存在量。荧光信号的增长可以直接反映PCR产物的数量,可以准确计算出靶基因的起始浓度。此外,该技术还可以通过不同荧光染料的选择,实现多靶点同时检测,从而提高检测效率。总之,荧光定量PCR技术的原理是通过荧光信号来实现基因数量的定量测定,具有高灵敏度、高精度和高通量等优点,是现代生物技术和生物医学研究中重要的实验手段之一。
八、荧光定量PCR技术?
实时检测PCR扩增,在扩增的指数期对起始模板进行定量,在扩增过程中,荧光信号随着PCR产物的增加而增强。我们实验室使用的BIOGHSC Super Probe Kit PCR实验检测DNA,测得的循环数在28左右,整个PCR过程有4个阶段,基线期---指数增长期---线性增长期---平台期,指数增长期内,PCR有高度重复性,一般的检测指标是看线性图谱的扩增曲线的起跳值(CT值)。
九、pcr荧光探针法?
实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。·
所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
十、数字PCR和荧光定量PCR的区别?
数字pcr和荧光pcr哪个更准确在定量PCR时,我们常常纠结一个问题,究竟是相对定量还是绝对定量呢?如今,你无需纠结了,因为数字PCR(digitalPCR)来了。尽管这两种技术有些类似,都是估计起始样品中的核酸量,但它们有一个重要的区别。
定量PCR是依靠标准曲线或参照基因来测定核酸量,而数字PCR则让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量。
因此特别适用于依靠Ct值不能很好分辨的应用领域:拷贝数变异、突变检测、基因相对表达研究(如等位基因不平衡表达)、二代测序结果验证、miRNA表达分析、单细胞基因表达分析等。