一、如何设定梯度PCR的退火温度？
回答如下：设定梯度PCR的退火温度需要考虑以下几个因素：
1.引物的Tm值：引物的Tm值是引物特异性的反映，它是引物在PCR反应中结合到模板DNA上的温度。在设定梯度PCR的退火温度时，需要根据引物的Tm值来确定。
2.模板DNA的GC含量：模板DNA的GC含量也会影响PCR反应的退火温度。GC含量高的DNA需要更高的温度来使引物与DNA结合，因此需要设定较高的退火温度。
3.特定目的：设定梯度PCR的退火温度也要考虑到特定的PCR目的。例如，如果需要扩增特定长度的DNA片段，需要根据引物的长度和目标DNA的大小来确定退火温度。
一般来说，可以先进行一次试验，设定一个范围内的温度梯度，然后根据PCR扩增的效果和产物的质量来调整退火温度，直到得到理想的PCR产物。
二、pcr温度梯度设置？
温度梯度pcr一般主要是指退火温度梯度。如果PCR仪支持的话，一次可以做好几个温度梯度，象AIB的可以做六个，而有些公司的是模仿梯度，比如一边高一边低，这样梯度温度可能误差大一点。如果仪器不支持，可能就麻烦了，想做六个温度就得做六次PCR了。每一次设成不同的温度。
三、pcr退火温度如何确定？
退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8） 只是粗算，有时不灵，但比较简便。
用primer5（or oligo6）计算，引物配对好后，primer5可以显示Tm，我认为这个值就是退火温度，我的经验再加2 or 3度最好。
四、PCR扩增退火温度确定？
计算退火温度的方法：
1. 退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8） 只是粗算，有时不灵，但比较简便。
2.用primer5（or oligo6）计算，引物配对好后，primer5可以显示Tm，我认为这个值就是退火温度，我的经验再加2 or 3度最好。
3.合成引物的单子上也有个Tm，减去5～8也可，但有些公司提供的Tm就是方法1计算的。
五、pcr退火温度怎么确定？
计算退火温度的方法：
1. 退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8） 只是粗算，有时不灵，但比较简便。
2.用primer5（or oligo6）计算，引物配对好后，primer5可以显示Tm，我认为这个值就是退火温度，我的经验再加2 or 3度最好。
3.合成引物的单子上也有个Tm，减去5～8也可，但有些公司提供的Tm就是方法1计算的。我认为方法二最准确，不知道还有其他方法吗？
六、pcr温度梯度怎么设计？
pcr温度梯度设计：
1、打开pcr仪。
2、打开pcr普通程序，按“tab”键将编辑区域调节至右侧选择是否进行梯度pcr选项，选择“是”。
3、按tab键回到左边程序，找到退火温度，在下方“±0.00”℃的地方输入你想进行的梯度。
4、找到与程序菜单并列的梯度菜单，点击进入，将中心温度调至与刚刚设置的温度一致，将准备好的pcr管放入对应的槽后记录对应的温度，然后打开设置的程序，点击“run”启动即可。
七、PCR的退火温度怎么设定？
PCR中退火的那步是引物与模板结合，一般来说，退火温度比Tm值要低上5度左右。另外，也可以根据你设计引物的软件比如primer5.0或Olige 6 推荐的温度。但这些都不是绝对的。
你要是在他的推荐温度下没有目的条带，你可以试试做一个温度梯度，摸索一下退火温度。
八、温度梯度pcr怎么做？
温度梯度pcr一般主要是指退火温度梯度。如果PCR仪支持的话，一次可以做好几个温度梯度，象AIB的可以做六个，而有些公司的是模仿梯度，比如一边高一边低，这样梯度温度可能误差大一点。如果仪器不支持，可能就麻烦了，想做六个温度就得做六次PCR了。每一次设成不同的温度。
九、pcr仪温度梯度怎么分布？
一般情况下，温度梯度是每0.2℃为一个梯度。
十、pcr退火温度太高有什么缺点？
引物退火温度是影响PCR的主要因素之一，一般来说每个引物都对应着各自的退火温度。影响：
以文献作参考，在一定的温度范围内，退火温度越高，扩增的特异性也就越高。
退火温度越低，扩增产物的特异性也就降低。
如果退火温度过高，引物与模板结合差，电泳条带差，甚至没有扩增。如果温度过低，扩增特异性差，杂带较多，背景深。