rtpcr是什么?

admin 泰里仪器网 2025-02-22 14:07 0 阅读

一、rtpcr是什么?

rtpcr可以理解为某个元器件代码为rtpcr,也可以解释为软件系统文件格式代码为rtpcr。

二、rtpcr检测什么?

检测基因的

RTPCR,反转录·聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)是将RNA的反转录(reverse transcription )和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。

首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆 特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组 DNA的污染。

三、rtpcr好做吗?

做 rt pcr不算难,按照操作步骤做就行了,只是要时刻注意防止核酸酶污染,以防pcr模板降解。

四、rtpcr计算公式?

相对表达量=总表达数量Ⅹ相对表达率

五、rtpcr和qpcr区别?

RT-PCR是real-time PCR的话,和qPCR是一样的,都是荧光定量PCR。相比普通PCR,会加入染料,便于收集荧光信号。结果可以得出相对/绝对 浓度等多组数据,然后根据你的目的,对实际数据进行分析。还能通过ntc的ct值判断实验合不合格。

六、rtpcr原理及应用?

RT -PCR

用于检测基因表达水平的反应

RT -PCR即逆转录-聚合酶链反应。原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级,使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于:分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。

七、rtpcr是什么水平?

答:RTPCR,反转录·聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)是将RNA的反转录(reverse transcription )和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。

RTPCR,反转录·聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)是将RNA的反转录(reverse transcription )和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。

首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆 特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组 DNA的污染。

提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用反转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板经行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。

八、做rtpcr难么?

做 rt pcr不算难,按照操作步骤做就行了,只是要时刻注意防止核酸酶污染,以防pcr模板降解。

九、rtpcr检测是什么?

RT-PCR技术

RT- PCR,即逆转录PCR,是将RNA的逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应(PCR)相结合的技术。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞/组织中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列等

首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆 特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组 DNA的污染。

用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA,三种都可。。

十、rtpcr和普通pcr区别?

半定量RT-PCR与定量RT-PCR的区别是半定量RT-PCR操作简便,可快速推测样品中特异mRNA的相对数量;而定量RT-PCB可实时定量,较半定RT-PCB更准确。

1. 半定量反转录-聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-PCR)是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法,通过mRNA反转录成cDNA,再进行PCR扩增,并测定PCR产物的数量,可以推测样品中特异mRNA的相对数量。

2. 定量RT-PCR(quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,qRT-PCR)是在用一步法或两步法,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

半定量RT-PCR与定量RT-PCR的区别是半定量RT-PCR操作简便,可快速推测样品中特异mRNA的相对数量;而定量RT-PCB可实时定量,较半定RT-PCB更准确。

半定量反转录-聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-PCR)是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法,通过mRNA反转录成cDNA,再进行PCR扩增,并测定PCR产物的数量,可以推测样品中特异mRNA的相对数量。

定量RT-PCR(quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,qRT-PCR)是在用一步法或两步法,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

半定量RT-PCR需要跑电泳,根据条带亮度的强弱来判断模板拷贝数的高低或者是表达量的高低,而定量RT-PCR则无需电泳可以实时监测整个PCR的全程并且由给出的Ct值及Standard Curve来判断gene拷贝数的高低。

荧光定量PCR和半定量RT-PCR都可以用来检测基因的表达量的,但二者检测的东西多少有些不同.BIOG染料法荧光定量PCR是在PCR反应体系中加入可以和双链DNA特异性结合的荧光染料或者和目的DNA片段结合的BIOG taqman,通过监控PCR过程中的荧光的变化,并且和某些管家基因的荧光变化进行对比反应出目标基因的表达量.荧光定量PCR的主要有效数据是荧光信号增长到最大值的一半时的时间.半定量RT-PCR则是通过RT-PCR最终产物电泳后电泳条带的明暗来间接反应出原始模板的丰度.荧光定量PCR因为是全程监控PCR扩增的变化,并且能够同管家基因的扩增曲线进行相对定量,而将基因的表达量数值化,准确度高于半定量RT-PCR.半定量RT-PCR因为是监控的最终产物,而在基因表达水平很高的时候,PCR体系很可能在反应中后期就饱和了,所以对于高水平表达的基因来说,用半定量RT-PCR并不能很准确的说明问题.

半定量rt-pcr参照的做法一般有两种:

1) 将要比较的两个样品的beta-actin 调成一样的亮度,然后就可以直接比较目的基因的亮度了。方法的结果比较直观,但较费事。

2) 不进行调平,一个样品里将目的基因和beta-actin直接比较,用软件就可以做到,然后将不同样品的这个比值进行比较就可以了。方法比较简单,但结果不够直观。

1.每个标本都要做自己的内参,不能用同一个内参!

2.每个标本在实际做前都要摸最佳循环数,包括内参,但内参的循环数不一定要和目的基因一样,都要选择上升期的中间数作为最佳循环数,否则进入平台期就没有可比性了!所以内参要有它自己的最佳循环数!

3.电泳扫描后,计算灰度值,先用同一标本的内参和目的进行比较,然后用这个相对值再去和其他你所要比较的平行组进行比较,一般每组4个样本以上。

The End
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