一、westernblot的目的？
Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。Western Blot显色的方法主要有以下几种： i. 放射自显影 ii. 底物化学发光ECL iii. 底物荧光ECF iv. 底物DAB呈色值得一提的是，western blot 这个名称的由来很有意思。最开始做印迹工作的是一个叫做Southern的科学家，但印迹的对象是DNA链，他把这种技术称为Southern blot，后来类似的出现了两个过程相似，但是对象不同的印迹方法，一个针对RNA，一个对蛋白质，人们分别把这两种技术的称为Northern和Western，与这两个技术的发明人没有关系了。
二、westernblot技术原理？
Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。
三、westernblot实验步骤？
Western，也叫 Western blot, Western blot blot, Western印迹法，是检测蛋白质抗体的重要方法之一。
实验步骤：
1.用块称量。
2.用液氮，将组织块粉碎。
3.加入 RIPA缓冲剂(每克组织3 ml RIPA)、 PMSF (每克组织30μ l,10 mg/ml PMSF)，继续保持4℃的 Polytron (每克组织3 ml RIPA)。
4. PMSF (每克组织30μ l,10 mg/ml PMSF)，冰上孵化30分钟。
5.移入离心管，4℃大约20,000 g (15,000转)。
6.将上清作为细胞裂解液，分装-20℃保存。
7.蛋白质浓度测定采用 Bradford比色法。
8.取相同质量的细胞裂解液(体积*蛋白质浓度)，加2×电泳加样缓冲液。
9.用开水浴3分钟。
10.上样。
11.电泳(浓缩胶20 mA，分离胶35 mA)。
12.转膜仪转膜(100 mA 40分钟)。
13.薄膜为丽春红染色，胶用考马斯亮蓝染色。
14.显色 Westernblot试剂盒。
15.比较记录分析。
四、westernblot条带的意义？
通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。
五、westernblot的具体步骤？
Western blot（也称为蛋白质免疫印迹）是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质，然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上，接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。
操作步骤：
1. 准备样品
1）制冰，准备冰盒。
2）配制细胞裂解液：根据细胞数量确定所需裂解液：50ul/六孔板一孔 。
裂解液配方：100ul碧云天裂解液+1ul蛋白酶抑制剂混合物+1ul PMSF
3）按实验需要准备好细胞：去掉培养基，1×PBS洗3次（去掉培养基中的血清），每个孔（6孔板）加入适量的裂解液。迅速用细胞刮刮下细胞并转移至1.5ml管中，置于冰上20min，振荡混合后，再置冰上10min。
4）12，000g，4℃离心15min，收集上清至另一1.5ml管。
六、westernblot封胶用什么？
我们都用去离子水压就行了，基本保证能够隔离空气，防止氧化就行。
七、westernblot是质谱仪技术吗？
westernblot是质谱仪技术。
Westernblot法即是一种将电泳与KIJSA结合起来的技术，可分为电泳、转印、酶免疫测定3个阶段。Westernblot法结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特异性，是一种能用于分析样本组分的免疫学测定方法。
八、westernblot原始数据提供什么？
Sapphire是多荧光检测系统，可多达4个激光光源，同时进行4通道荧光检测，获得更快的工作流程和更可靠的定量数据。
☑ Sapphire配合AzureRed总蛋白荧光染色剂可以做总蛋白归一化和定量三个靶标蛋白，生成可以信赖的定量Western Blotting数据。
九、westernblot条带颜色深浅代表什么？
可能是抗体的问题，也有肯能是你显色时候显色剂的问题，也有可能是转膜的时候没转过来或者电压太大时间太长转过了，露走很多。可以多做几次，自己查找原因。
十、westernblot电泳后胶版怎么保存？
电泳液和转膜液都可重复利用3次左右 考马斯亮兰染液也可以重复用。新配的染液10分钟即可，重复3次后要染30分钟。 一抗二抗可以重复利用,但是注意要在5%milk中加入0.2% sodium azide ,并且用完以后放入4度保存,我的经验重复使用4-5次是肯定没有问题的.如果保存不当,就会污染微生物,只能丢弃.