一、dna扩增原理?
DNA扩增原理是一种利用聚合酶链反应(PCR)来高效地复制指定DNA片段的技术。它可以在几小时内将极少量的DNA分子放大成几百万份,从而为临床检测提供了可能。
二、dna扩增技术名词解释?
DNA扩增技术即基因扩增技术,又称无细胞分子克隆技术或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术,可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍,从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力。
DNA扩增技术具有敏感性高、特异性强、快速、简便等优点。其基本原理为:
1、将含有所需扩增分析序列的靶DNA双链经热变性处理解开为两个寡聚核苷酸单链;
2、加入一对根据已知DNA序列由人工合成的与所扩增的DNA两端邻近序列互补的寡聚核苷酸片段作为引物;
3、引物与互补DNA结合后,以靶DNA单链为模板,经反链杂交复性(退火),在Taq DNA聚合酶的作用下以4种三磷酸脱氧核苷(dNTP)为原料按5'到3'方向将引物延伸、自动合成新的DNA链、使DNA重新复制成双链。
三、pcr技术扩增目的基因是dna还是rna?
是将待扩增的DNA模板加热变性,与其两侧互补的寡聚核苷酸引物复性,然后经过耐热的DNA聚合酶延伸。再进入下一轮变性—复性—延伸的循环,n次循环后DNA可被扩增(1+X)n倍。其中<25nt的引物退火温度Tm=2(A+T)+4(G+C)。
3.器材
旋涡混合器,微量移液取样器,
移液器
吸头,0.2ml PCR微量管,双面微量离心管架,PCR仪,台式离心机,
琼脂
糖凝胶电泳系统,水漂,
恒温
水浴。
4.
试剂
5U/μl Taq DNA聚合酶,PCR缓冲液(10×,MgCl2 free),25mM MgCl2,dNTP,引物,模板质粒pBS-CHI,无菌ddH2O。
四、DNA的PCR扩增里,3”端,5”端怎么分的?
看序列,引物与模板结合是从3端到5端合成与模板互补的DNA链
五、急!PCR在n轮扩增后DNA分子数?
DNA分子数为2的n次方,含长链或中链的DNA分子数为2n,只含短链的DNA分子数为2的n次方减去2n
六、hpv-dna扩增定量四项多少钱?
hpv-dna扩增定量四项检查的费用一般在200到300左右的,建议先看看分泌物的变化,然后遵医嘱来安排检查的时间等,一般检查后1周会有结果的,从检查的结果可以判断是否有人乳头病毒的感染等。一旦发现感染,需要及时的做治疗或者处理的。
七、PCR扩增仪与DNA合成仪一样吗?
看设备吧。我用的Applied Biosystem的thermal cycler是可以既做cDNA synthesis 又做qPCR反应的。但是之前用的Biorad的thermal cycler就只能做cDNA synthesis 和普通的PCR (不能定量)。
你主要要理解这两个反应的原理是什么,再看一下设备型号和说明书就知道了。
总的来说,这个所谓的扩增仪和合成仪本质上都只是一个控温加热器。所以在不要求定量的条件下,设定好加热控温程序,thermal cycler是都可以做的。但是做qPCR的仪器除了控温,还要有荧光检测(激光)装置,所以相应的仪器体积(包括激光扫描和防辐射外壳等)都比只能做普通PCR和cDNA合成的仪器要大很多。
希望回答了你的疑问。
八、检测提取的基因组dna和扩增的pcr产物时为什么要加dna marker?
DNA maker是一种分子量已知的几种片段的混合物,在电泳时可以标定目标片段的分子量大小。
常用于PCR产物的标记,当出现一条带并且大小与预期一致时可认为片段正确,反之,当大小不一致或者有多条片段时,需优化PCR条件。当DNA maker用于标定基因组DNA时常用于原核生物基因组或质粒等单一组分的分子量预测九、pcr过程中,dna的扩增是否可以无限进行?为什么?
PCR随着反应底物(引物、dNTP、酶的活性等)的耗尽,还有产物DNA的过高,肯定会抑制反应的进行。PCR有一个平台期的,就是达到这个水平后,产物的增长速度非常慢了。
十、pcr扩增产物数量与扩增的循环数n有关,那目的扩增产物数量是否就是2的n次方个dna分子,为什么?
不是,你自己画一下PCR流程图就知道了,即便不考虑线性扩增的那些产物,指数扩增的目标片段增长应该是2的(n-2)方,也就是说,头两个循环里没有目标产物生成