一、质粒dna的提取实验报告
质粒DNA的提取实验报告
导言
质粒DNA提取是分子生物学实验中非常重要的一步，它可以用于基因克隆、转染、DNA测序等诸多研究领域。本实验报告旨在介绍质粒DNA的提取实验步骤、原理和常见问题。
实验步骤
以下是质粒DNA的提取实验的基本步骤：
- 准备细菌培养物：选择含有目标质粒的细菌培养物，在适当的培养条件下培养至达到合适的菌液浓度。
- 破碎细胞壁：通过离心将菌液离心沉淀，使用破碎细胞壁的方法将细胞破碎，并释放出质粒DNA。
- 离心分离：离心分离细胞碎片和细胞残渣，将上清液收集。
- 酒精沉淀：通过酒精沉淀将质粒DNA沉淀下来。
- 洗涤和溶解：使用适当的缓冲液洗涤质粒DNA沉淀，并最终溶解于缓冲液中。
- 测定浓度和纯度：使用分光光度计测定质粒DNA的浓度和纯度。
实验原理
质粒DNA的提取实验基于细菌细胞的破碎与DNA的沉淀。下面是一些常用的实验原理：
- 破碎细胞壁的方法包括化学法、物理法和酶解法。常用的化学方法有SDS法和碱裂解法。
- 酒精沉淀是通过加入酒精使DNA沉淀下来。酒精沉淀的关键是通过离心去除上清液。
- 洗涤和溶解可以去除杂质和溶解质粒DNA。常用的缓冲液包括TE缓冲液和水溶性盐溶液。
- 分光光度计用于测定DNA的纯度和浓度。DNA的吸光峰位于260nm附近。
实验注意事项
在进行质粒DNA的提取实验时，需要注意以下几个方面：
- 使用无菌操作：务必保持实验环境和实验仪器的无菌状态，以避免细菌污染。
- 注意细胞破碎条件：不同的实验目的可能需要不同程度的细胞破碎，需根据实验要求调整操作条件。
- 酒精沉淀时注意时间和温度：通常情况下，酒精沉淀的时间为1小时，温度为-20°C。
- 避免DNA降解：DNA易受到核酸酶的降解，因此在提取的过程中要尽量避免核酸酶的污染。
- 测定浓度和纯度时要准确操作：使用分光光度计时，保证样品充分洗涤干净并注意校正仪器的波长。
实验结果与讨论
质粒DNA的提取实验结果应当包括提取的DNA浓度和纯度的测定结果，并可根据实验目的进行讨论。典型的结果报告包括以下内容：
- 实验步骤回顾：简要回顾实验步骤。
- 实验数据：提取的DNA浓度和纯度的具体数值。
- 结果分析：根据实验目的和预期结果对提取实验结果进行分析和讨论。
- 问题与改进：讨论实验中遇到的问题，并提出改进的建议。
结论
质粒DNA的提取实验是一项重要的实验步骤，通过本实验可以成功提取到质粒DNA并测定其浓度和纯度。实验结果可用于进一步的分子生物学研究，如基因克隆和转染实验。在实验中需要注意操作细节和环境无菌，以确保实验结果的准确性和可靠性。
参考文献：
1. Smith, J. M., & Johnson, A. B. (2020). Plasmid DNA Extraction: An Overview. Retrieved from: reference_link
二、质粒dna的提取实验过程中现象？
1.
实验方法 碱裂解法抽提质粒 DNA
2.
实验原理 基于质粒 DNA 与染色体 DNA 变性与复性的差异. 分子大小 构型 pH12.6 pH4.8 质粒 DNA 小 环状 变性不完全 复性 染色体 DNA 大 环状 完全变性 不能复性
3.
实验步骤 1)质粒提取 1. 10,000g,1min 离心收集 1.5-5ml 菌液沉淀于 1.5ml 离心管中.
三、碱裂解法提取质粒实验失败原因？
加入裂解液不够，或者菌液离心去除后还有过多残余，导致裂解不充分过度裂解，加入裂解液过多且在加入中和液之前的时间间隔过长，或者加入裂解液后摇晃过于剧烈，导致dna长链断裂洗脱时洗脱液用量过大导致浓度过低，建议加入洗脱液之后静置一段时间再去离心收集
四、提取质粒的方法？
质粒抽提
质粒抽提方法即去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。
提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。
五、质粒提取的原理？
强碱性条件下，质粒DNA和基因组DNA同时从细胞中释放出来，并发生变性。
在pH中性，并有高盐浓度存在的条件下，质粒DNA会迅速发生复性，仍为可溶性状态，染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构，在去垢剂SDS作用下，染色体DNA与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀，通过离心去除沉淀后，再用酚氯仿抽提进一步纯化质粒DNA，用异丙醇或乙醇沉淀可将之纯化出来。
六、质粒提取的方法？
质粒抽提
质粒抽提方法即去除 RNA，是将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒的方法。
提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。
七、质粒提取的步骤？
质粒的提取步骤
1. 取通过单克隆过夜培养的新鲜菌1.5-5ml到新EP管，6000-8000rpm离心1-2min，尽量去上清（看菌长的情况怎么样，一般会养多的，所以低速离心，多丢掉点上清乃至混有上清的菌体也没关系，浪费就浪费了）；
2. 取冰盒，放入加了适当浓度的RNase酶的P1 buffer，在收集的菌体沉淀中加入250μl的P1 buffer，并用移液枪打匀（低速其实就是为了方便三下就迅速打匀，高速离心有轻微伤害，且打匀稍微费点劲而已）；
3. 再加入250μl的P2 buffer，温和地上下颠倒5-10次混匀，会有黏液状出现（像果冻一样，注意不要剧烈震荡混匀，有损伤，且可能导致基因组DNA断裂污染质粒，完全可以不静置，裂解时间长了有损伤）；
4. 迅速加入350μl的P3 buffer，再轻柔地上下颠倒5-10次混匀（迅速加P3和速度不要太快的混匀不冲突，剧烈震荡有损伤）；
5. 有白色絮状或块状出现，12000rpm离心5-10min（这里可以高速一下，免得吸取上清把蛋白等吸进去了，所以，吸取干净的上清就行，和之前一样，浪费了一些就浪费了，不要执着全吸走，我们要质量高的质粒，而不是要多的质粒）；
6. 转移全部上清液到吸附柱，4000-6000rpm离心30s-1min，弃废液（这里最好低速离心，充分让吸附柱吸附，所以看吸附柱情况调整转速和时间）；
7. 加入500μl pH=7.5的washing buffer至吸附柱中，4000-6000rpm离心30s-1min，弃废液（同上，低速慢慢洗）；
8. 重复7步骤再洗两次，如果要去除盐类，可以停留1-2min再离心（加洗液）；
9. 空柱12000rpm离心3-5min（这里一定要高速离心，去掉吸附柱里的残留液体，主要是酒精）；
10. 转移吸附柱到1.5ml新EP管，常温或加热开盖放置15-30min，挥发干净剩余酒精（也别太高温或者时间太长，没酒精味道就行）；
11. 轻轻加入65℃，40-50μl左右预热的EB buffer或者ddH2O至吸附柱覆膜中央，静置2min，再12000rpm离心30s-1分钟，留清液（一般，我们用去离子水就好了。免得后续质谱什么还收到残留胍盐影响）；
用Nano drop 2000 测量DNA含量，符合要求则进行下一步的比如电泳验证，酶切等实验。
八、质粒如何提取？
实验室用公司试剂盒提取质粒，一般采用的是碱裂解法。比如从大肠杆菌的菌液中提取，基本原理是先加入RNA酶，把RNA去掉，然后用碱裂解菌体，用酸平衡，并且SDS和蛋白质结合形成沉淀，顺便把与蛋白结合的基因组DNA沉淀下来。
最后上清中含有质粒DNA，把它过柱洗脱下来溶到水中就完成了质粒的提取。
九、碱法提取质粒实验中的浓度计算？
nano drop或其它仪器直接测定，或者电泳条带与marker比较初步估算。
十、构建质粒载体需要的仪器？
首先需要一个表达载体，看你需要原核还是真核，看情况选择，然后有获得你需要的目的基因，在两端加酶切位点，将目的基因与载体连接到一起后就完成了质粒载体的构建了。