一、安捷伦gcmc质谱分析仪器的使用方法?
1、质谱开机
打开质谱前面左下角的电源开关,这时可以听到质谱里面溶剂切换阀切换的声音,同时机械泵开始工作,仪器开始自检。等待大约两分钟,听到第二声溶剂阀切换的声音(表明质谱自检完成)后,表示仪器自检完成,可以联机。
质谱一接通电源,前级真空规就开始工作,监视前级真空值,但只有当Turbo1和Turbo2涡轮泵的转速都大于95%之后,四级杆的高真空规才会开始工作,正常读取真空值。
2、仪器模块的不同的颜色代表了仪器的不同状态
绿色:Ready,表示仪器准备就绪,可以随时进行样品分析
蓝色:表示仪器正在运行样品
粉色:表示仪器处于等待运行的状态
黄色:Not Ready,表示仪器的状态还没有准备好或者仪器条件还没有达到设定值
灰色:表示仪器 处于Standby 或Shut Down状态
红色:表示仪器出错
3、Logbook记录本
当仪器出现故障的时候,应点击仪器事件记录本的快捷按钮查看具体的错误信息。
4、二元泵
Purge&Prime
一般来说,Purge用于日常的流动相排气泡,在更换流动相或者每天刚开机时使用,Prime用于比较剧烈的冲洗,如果系统中有明显的气泡,在做Purge无法除去时建议使用,流动相干涸的时候直接使用Prime灌注。如果排气不彻底,泵头内残留有微小的气泡,则会导致压力不稳定,如果Prime和Purge都不能使压力稳定下来,使用甲醇或异丙醇冲洗系统,水有时因为表面张力大,比较难以操作。
Seal wash
其功能是在使用缓冲盐溶液的时候,冲洗柱塞杆外部,延长柱塞杆的寿命。一般设置成间隙性工作,比如每5min冲洗0.2分钟,Single wash一般用于排空柱塞清洗管路中的气泡,或者更换柱塞清洗溶剂的时候。柱塞清洗使用10%的异丙醇水溶液,只要安装了柱塞清洗装置,就应该使用,否则可能损伤柱塞杆,降低其使用寿命。
5、柱温箱
柱温箱的设定温度低于室温时不建议开启漏液检测功能。
6、自动进样器
取样位置可以调整进样针的插入位置,默认为零,使用标准样品瓶时针尖距离瓶底得距离约为5mm,当样品量比较多并且担心有沉淀的时候,可以选择把针的位置抬高(多比默认位置抬高5mm)。
当样品量很少时,也可以考虑把进样针的位置降低(多比默认位置降低10mm),如果设置降低针的位置,应注意每个自动进样器可以降低的数值不一样,防止进样针降得过低扎坏样品瓶,损坏进样针和自动进样器。
另外一个选择就是使用自动平底检测功能,如果使用此功能的话,请把样品放在两个样品盘上,而不要放在右侧1-10的位置,并且注意自动瓶底检测功能不能和取样位置调整同时使用。另外,在使用内插管的时候,不要使用Bottom Sensing的功能。
7、方法建立
不建议使用已有方法直接选择“另存为”来创建方法,通过缺省的方法模板来创建新方法比较好。
8、方法编辑界面Sample设置参数解读
Sample position
单针进样时的瓶位,如果设置为“-1”,则不启动自动进样系统,只走旁路bypass。此时可以检查自动进样系统是否存在污染。
在默认的操作条件下,除了在进样的过程中,自动进样器都是在Main Pass的流路,这样的流路设计是进样针和针座的内表面一直都在被流动相连续冲洗,减小了样品的残留和交叉污染。
wait time for ready
等待ready的时间,若时间到还未ready,则仪器stop,一般默认10min,如果缩短时间,吸取大进样量样品时时间不足可能导致仪器not ready,终stop
Inject volume
单针进样时的进样体积,如果设置为“-1”,则默认为方法里面自动进样器参数下的进样量,若为一个有实际意义的值,则实际进样量就是该数值,方法里面的进样量被忽略。如果设置为“0”,则启动进样系统,但不进样;
运行序列时,该体积不起作用,以序列表中的进样体积或sampler自动进样器体积(序列表中未编辑进样体积时)为准。
9、方法编辑界面MS QQQ 设置参数解读
Time Filtering时间过滤
一种色谱图的平滑处理选项,如果不选择,则对色谱图不会进行任何平滑,如果使用此选项,那Peak Width的设置大值为样品的窄色谱峰的半峰宽,超出就会出现数据采集丢峰的情况,使用此复选框的时候,软件自动每11个数据点进行一次高斯平滑
二、激光质谱分析方法分类?
激光质谱法laser mass spectrometry依靠激光使待分析样品离子化的质谱分析法。
激光的主要作少IJ是激光解吸和共振电离。激光解吸主要用于热不稳定和难挥发有机化合物分析;而共振电离既可用于无机物分析,也可用于有机物分析。通过调节激光的波长和能量,可以使电离状况得到控制,使电离具有选择性,以利于消除某些干扰或进行某些特殊分析激光质谱的分析范围可以包括无机、有机和生物领域,样品可以是固态,液态或气态。元素周期表中所有元素均可测定,且灵敏度极高。其缺点是谱图的重现性稍差。
三、液质图谱分析步骤?
液质图谱的分析步骤包括:
1、样品准备:对样品进行处理和提取,以便绘制液质图谱。
2、建立信号和峰的表达规律:通过绘制物质的液质图谱,建立不同物质的信号和峰的表达规律,以便后期分析和认识。
3、数据处理:对收集到的模式图谱数据进行处理,利用数学方法对数据进行压缩、变形和分离,提取特征信号。
4、参数优化:根据提取出来的特征信号,优化参数,以达到最佳拟合效果。
5、质量检验:通过定量分析处理后的液质图谱,验证其正确性和准确性,以确保最终的分析结果的准确性。
四、质谱分析法属于色谱分析吗?
属于色谱分析方法的一种。色谱分析还包括气质连用,液质联用等等
五、光谱分析仪器原理?
光谱分析仪器是一种用于分析物质的化学成分和结构的仪器,其原理基于物质与电磁波的相互作用。光谱分析仪器的主要原理包括以下几个方面:
1. 原子或分子的光谱:每种化学元素或化合物都有自己的光谱,当这些物质受到特定波长的电磁波辐射时,会发生吸收或发射特定的光谱线。通过检测这些光谱线,就可以确定物质的成分和结构。
2. 光谱仪的工作原理:光谱分析仪器通常由光源、样品室、光谱仪和检测器等组成。光源会产生一束电磁波,样品在样品室中与电磁波相互作用后,会发生吸收或发射光谱线,光谱仪会将这些光谱线分解成不同的波长,并通过检测器记录下来。
3. 原子吸收光谱:原子吸收光谱是一种常用的光谱分析方法,它基于原子在特定波长的电磁波辐射下吸收特定波长的光谱线。当原子吸收特定波长的光线时,会发生电子的激发和跃迁,在吸收光谱线的波长和强度等方面表现出特定的特征,可以用于确定物质的成分。
4. 分子吸收光谱:分子吸收光谱是一种用于分析有机化合物成分和结构的方法,它基于化合物在特定波长的电磁波辐射下吸收特定波长的光谱线。当分子吸收特定波长的光线时,会发生分子内部的电子激发和振动等变化,从而产生特定的吸收光谱线,可以用于确定有机化合物的成分和结构。
综上所述,光谱分析仪器的原理基于物质与电磁波的相互作用,通过检测化学元素或化合物吸收或发射的光谱线,可以确定物质的成分和结构。
六、质谱分析的主要用途?
质谱分析广泛应用于有机化学、生化、药物代谢、临床、毒物学、农药测定、环境保护、石油化学、地球化学、食品化学、植物化学、宇宙化学和国防化学等领域。
七、蛋白质质谱分析具体流程?
肽指纹图谱:
每个蛋白都有理论上消化后所得出的不同肽段,这些肽段的质量(分子量)就是这个蛋白的肽指纹图。
当一个未知蛋白被酶解,用质谱可以检测出其中所含有几乎所有肽段的质量。然后把这些质量与数据库中已知的所有蛋白指纹进行匹配。
匹配分值高过一定的 就可以认为索要坚定的蛋白就是那个目的蛋白。
步骤:
2DE 切点 消化 送入质谱仪分析 质谱仪自动获得质量数 送入数据库进行搜索 得出结果。
关键:要知道质谱仪是用于检测小分子质量的仪器,只可以检测质量。
八、如何简单理解质谱分析法?
如何选择质谱分析方法? ——是用于研究蛋白,核苷酸还是小分子,这里也许有理想的答案 正如其它先进的技术一样,质谱技术冲击带来了市场的膨胀,造成了多选择性的产品,专业性的术语,这也就无形中增加了研究人员选择合适于他们的系统的困难性。正如西雅图Fred Hutchinson癌症研究中心蛋白组主任Philip Gafken所说的那样,“无论大家相信与否,这种技术并没有如它们所被应用的那样被逐渐的了解,研究人员没有认识到利用这种技术的真正目的。” 比如说三级四极质谱仪(Triple Quadrupole Mass Spectrom)是一种相对便宜一点,但扫描速率(scan rate)也相对比较慢的质谱仪,而目前精良的傅立叶变换离子回旋共振质谱仪(Fourier transform ion cyclotron resonance,FTICR)则在精确性和分辨率都是首屈一指的,当然价钱也会比较贵。 Gafken说道,“人们总是倾向于购买一些顶级的产品,但是事实上,这些应用中很大一部分都能由一些相对便宜一点的仪器来完成”,所以我们需要购买适用于各自需要的正确仪器。 1.Protein Chemist级 对于protein chemist而言,需要得到的仅仅就是知道他在研究的是什么。通过分析一种蛋白的免疫共沉淀的成份,或者利用二维电泳识别特殊的蛋白斑点,protein chemist就可以了解这种蛋白质的生物学特性了。对于这种应用,快速而并不需要太精确的方法就可以满足需要了。 推荐系统:MALDI+TOF 理由:肽指纹图谱(PePtide Mass Fingerprinting,PMF)和基质辅助激光解析电离飞行时间(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight,MALDI-TOF)质谱是可以考虑的首选方法。 TOF是一种简单的质谱分析系统,灵敏度高,能进行从10原子质量单位到上百上千单位的片段分析。另一个TOF的优点就是分析的速度,伊利诺斯大学的化学副教授Neil Kelleher就表示“这就是它为什么能与MALDI配合工作的原因,你可以以一种高重复率在激光上操作,每秒获得许多光谱。” 而MALDI则是一种首先就可以考虑的方法,但是并不适合如何人,来自华盛顿大学的化学教授,Journal of the American Society for Mass Spectrometry杂志的编辑Michael Gross就说,“如果你的免疫共沉淀中有20或30个蛋白,每一个有50条特殊带,那么你就有1000条带,利用MALDI并不能在气相中打到全部的”,为了得到更多的信息,必需要考虑一个可以提供序列详细信息的任意构造,比如MALDI-TOF-TOF,或者一个更加灵敏的仪器——离子捕获。 2. 灵敏级 难题总是出在事实本质的详细内容当中,对于蛋白而言,那就是指翻译后修饰了。比如说,假设你正在研究包含有乙酰化和三甲基化修饰的组蛋白,但是一个标准的质谱也许无法区别出这两种修饰,这时就需要高精度的仪器了,这种仪器能获得二位或者四位小数位的报告。 推荐系统:LC+ESI+FTICR with ECD 理由:准确度高的仪器可以区别对于所谓的正常(nominal-mass)仪器而言相同的分子,一般认为选择液相色谱(liquid chromatography,LC)与电喷雾电离化(electrospray ionization,ESI),以及傅立叶变换离子回旋共振质谱仪(Fourier transform ion cyclotron resonance,FTICR)相结合能达到高精度和高灵敏度的要求。也许还需要电子捕获解离技术(electron capture dissociation,ECD)来获得可重复的结果。 虽然经典的碰撞诱导解离技术(collision induced dissociation,CID)介导的串联质谱方法可以进行斑点修饰(spot modifications),但是对于识别包含了修饰的蛋白残基而言,这并不是一种理想的方法,这主要是由于解离蛋白的时候常常会降解多肽的蛋白修饰,然而ECD则可以保持这种修饰的完整性。不过来自辛辛那提大学的Patrick Limbach提出一个忠告:这些仪器偏差范围小,因此可能会丢失掉一些未预期到的情况,比如天冬酰胺残基的脱酰胺,或者磷酸化。
九、光谱分析为什么是仪器分析?
光谱分析的原理是利用原子的物理性质进行分析,不涉及化学反应,故是仪器分析。
十、ip-ms质谱分析的基本流程?
1、确认分子离子峰,并由其求得相对分子质量和分子式;计算不饱和度。
2、找出主要的离子峰(一般指相对强度较大的离子峰),并记录这些离子峰的质荷比和相对强度。
3、对质谱中分子离子峰或其他碎片离子峰丢失的中型碎片的分析也有助于图谱的解析。
4、用MS-MS找出母离子和子离子,或用亚稳扫描技术找出亚稳离子,把这些离子的质荷比读到小数点后一位。
5、配合元素分析、UV、IR、NMR和样品理化性质提出试样的结构式。将所推定的结构式按相应化合物裂解的规律,检查各碎片离子是否符合。若没有矛盾,就可确定可能的结构式。
6、已知化合物可用标准图谱对照来确定结构是否正确,这步工作可由计算机自动完成。对新化合物的结构,结论要用合成此化合物并做波谱分析的方法来确证。